小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒使用說明書
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒 試劑盒名稱】
小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒 試劑盒用途】
定量小鼠血清、血浆及相关液体样本中抗透明带抗体(aZP) 的含量
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒檢測原理】
本試劑盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被抗透明带抗体(aZP) 透明酶標包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中抗透明带抗体(aZP) 浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，計算样本中抗透明带抗体(aZP) 含量。
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒 試劑盒組成】
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1 |
酶標包被板 |
12孔×8條 |
7 |
底物夜A |
6mL |
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2 |
標准品：200ng/ml |
0.6mL |
8 |
底物夜B |
6mL |
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3 |
20倍濃縮洗滌液 |
20mL |
9 |
終止液 |
6mL |
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4 |
標准品稀釋液 |
6mL |
10 |
說明書 |
1份 |
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5 |
樣本稀釋液 |
6mL |
11 |
封板膜 |
1張 |
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6 |
酶標試劑 |
6mL |
12 |
密封袋 |
1個 |
備注：标准品用標准品稀釋液依次稀释为：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2、 標准規格酶標儀
3、 精密移液器及一次性吸頭
4、 蒸餾水
5、 一次性試管
6、 吸水紙
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒操作步驟】
1、准備：從冰箱取出試劑盒，室溫複溫平衡30分鍾。
2、配液：用蒸馏水将20倍濃縮洗滌液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶標包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按說明書操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重複4的操作。
8、洗板：重複5的操作。
9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。
10、终止：取出酶标板，每孔加終止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。
11、測定：以空白孔調零，在終止後15分鍾內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據標准品的濃度及對應的OD值，計算出標准曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。終濃度爲實際測定濃度乘以稀釋倍數。
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒 樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因爲疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2、標本采集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反複凍融。
3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒注意事項】
1、实验严格按照說明書的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2、酶標包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3、建議所有的標准品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量范围为0.1-200ng/ml，超过此范围，为标准曲线延伸計算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果（0.1-200ng/ml范围内），乘以总稀释倍数即为样本终浓度。
6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。
7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、樣本稀釋液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。
8、試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。
9、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒操作程序總結】
准備試劑，樣品和標准品
加入准備好的樣品和標准品，37℃反應30分鍾
洗板4次，加入酶標試劑，37℃反應30分鍾
洗板4次，加入顯色液A、B，37℃显色15分鍾
加入終止液
15分鍾之内读OD值
計算
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒檢測範圍】
0.1-200ng/ml
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒規格】
96T/盒、48T/盒
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒貯藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【小鼠抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒有效期】
6個月
